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快三app脑内注射B淋巴细胞可改善脑挫裂伤患者的功能预后

2019-09-17 高闯 孙一睿

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​脑挫裂伤引起神经功能紊乱可能与损伤所致的炎性反应相关。

快三app美国哈佛大学医学院麻省总医院免疫疗法中心的Ruxandra F. Sîrbulescu等借助控制性皮质冲击伤(controlled cortical impact,CCI)模型,评价外源性输注成熟B淋巴细胞能否改善脑外伤后脑组织的形态和功能预后。文章发表于2019年5月的《J Neurotrauma》在线上。


——摘自文章章节



【Ref: Sîrbulescu RF , et al. J Neurotrauma. 2019 Sep 1;36(17):2579-2589. doi: 10.1089/neu.2018.6368. Epub 2019 May 23.】


研究背景



脑挫裂伤引起神经功能紊乱可能与损伤所致的炎性反应相关。B淋巴细胞属免疫系统的重要组成部分,其在脑外伤中的作用尚无系统研究。成熟的B淋巴细胞具有免疫调节功能,并能促进组织再生,包括急性和慢性皮肤损伤后的皮神经生长。美国哈佛大学医学院麻省总医院免疫疗法中心的Ruxandra F. Sîrbulescu等借助控制性皮质冲击伤(controlled cortical impact,CCI)模型,评价外源性输注成熟B淋巴细胞能否改善脑外伤后脑组织的形态和功能预后。文章发表于2019年5月的《J Neurotrauma》在线上。


研究方法



研究者选取12-14周雄性C57BL6/J小鼠(体重25-32g)建立CCI模型。雄性C57BL6/J小鼠和FVB‐Tg(CAG‐luc‐GFP)L2G85Chco/J(均来自巴尔港杰克逊实验室)用来作为分离B细胞和T细胞的同基因供体。采用阴性抗原分离淋巴细胞,成熟B淋巴细胞(CD45R+/CD19+)比率可大于98%;将淋巴细胞加入无菌生理盐水制成悬浮液,浓度4x105/ul。根据注射的溶液不同,实验动物分为B淋巴细胞组、T淋巴细胞组、盐水组、假手术+B淋巴细胞组以及假手术+盐水组。注射部位为前囟后1mm,中线左侧2mm的左侧脑实质内注射。注射结束后,立即建立CCI模型(CCI参数为:速度6m/s,深度0.6mm,停留时间100ms)。然后,采用Y臂迷宫、水迷宫和转杆实验等功能试验评价TBI后小鼠神经功能障碍。同时在活体上观察B淋巴细胞在小鼠体内的存活周期。通过免疫荧光技术评价脑创伤区的胶质细胞活化程度;应用HE染色比较不同治疗组的创伤灶的大小。


研究结果



活体的B淋巴细胞示踪显示,注入的B淋巴细胞可在脑创伤区聚集;B淋巴细胞存活14天,无增殖,对脑组织有显著的保护作用。转杆实验显示,B淋巴细胞可改善小鼠运动学习功能和纹状体学习功能;B淋巴细胞组和假手术组小鼠从杆上跌落的时间随着实验重复显著延长,说明小鼠有运动学习能力。在T淋巴细胞组和盐水组小鼠中未观察到学习能力的改善。B淋巴细胞组与假手术组小鼠之间的学习能力无明显差异。在用电线握持实验评价小鼠前庭运动功能时,CCI组小鼠的表现比假手术组差,但不同治疗组之间无明显著差异。


水迷宫实验的学习曲线显示,注射B淋巴细胞的CCI小鼠比注射盐水的CCI小鼠学习能力显著改善(p<0.05)。而B淋巴细胞组与假手术组无显著差异(p>0.98)。平台实验显示,CCI组和假手术组的不同治疗效果无统计学差异。探索实验表明,B淋巴细胞组CCI小鼠在目标象限的逗留时间大于随机水平,与假手术组无差异;相反,注射T淋巴细胞组或盐水组CCI小鼠在目标象限的逗留时间处于随机水平,显著低于假手术组(p<0.05);探索实验的代表性游泳路径示踪表明,B淋巴细胞组CCI小鼠和假手术组小鼠有较强的空间探索能力,而T淋巴细胞组或盐水组小鼠则无空间探索功能。Y臂迷宫实验反映短期学习和记忆能力,B淋巴细胞组CCI小鼠得分比T淋巴细胞组或盐水组小鼠显著升高。


注射B淋巴细胞可以改善CCI小鼠焦虑和抑郁样行为。与T淋巴细胞组和盐水组相比,注射B淋巴细胞CCI后的小鼠认知功能改善和恢复;CCI后35天的创伤灶总体积在B淋巴细胞组明显缩小,比T淋巴细胞组和盐水组小鼠减少40%-60%;B淋巴细胞可显著削弱CCI后小鼠创伤灶的胶质细胞活化。B淋巴细胞组小鼠的海马体积大于T淋巴细胞组和盐水组小鼠。


结论



最后作者认为,对于急性和亚急性脑挫裂伤,局部应用从外周循环分离的B淋巴细胞可能是安全、有效的细胞治疗方案。